小鼠巨噬細(xì)胞分離方法

小鼠巨噬細(xì)胞分離方法
腹腔中分離

　　1、小鼠巨噬細(xì)胞取6周左右的小鼠（或600克左右的豚鼠，或3公斤左右的家兔），剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml（豚鼠20ml，家兔200ml）無菌的液體石蠟或巰基乙酸肉湯或4%淀粉肉湯。3～4天以后收集腹腔細(xì)胞。

　　2、如要收集腹腔靜置巨噬細(xì)胞，不注射刺激物，直接從一步開始。放血處死動(dòng)物，以減少腹腔中的紅細(xì)胞。消毒腹部，沿腹中線注入3～4ml（豚鼠20～40ml，家兔50～70ml）冰中預(yù)冷的無菌PBS-H（含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS）。輕輕按摩腹部5分鐘。

　　3、以下均無菌操作。剪開腹壁，用吸管吸出滲出液，再用同樣容量的預(yù)冷PBS-H沖洗腹腔2～3次。合并滲出液于離心管中，4℃離心250×g10分鐘，去上清液。

　　4、用預(yù)冷的RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，每次4℃離心250×g10分鐘，去上清液。用預(yù)冷的適量RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞并決定細(xì)胞活力。

　　家兔肺泡小鼠巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞的分離和純化

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